实时荧光定量PCR实验结果分析.pdf

发布时间：2022-06-01 发布人：admin 分类：说明书资料大小：2.27M 资料格式：pdf 举报版权申诉

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定量PCR应用

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实验设计流程

材料和方法

RNA定性及定量分析

一步法＆两步法

设计qPCR实验方法

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RT-qPCR实验

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结果分析-单双通道相互验证

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结果计算-双标准曲线

结果计算- 2-ΔΔc(t) 法

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Slide Number 17

转基因产品介绍

转基因产品成分检测

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Slide Number 21

设计qPCR实验方法

Slide Number 23

数据收集与处理

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Slide Number 28

Slide Number 29

提纲

Slide Number 31

SNP 分析 & 技术

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Slide Number 34

Slide Number 35

Slide Number 36

HFE by multiplex TaqMan

设计qPCR实验方法

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Slide Number 42

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Slide Number 44

Slide Number 45

Genotype: H63D/C282Y杂合子

H63D data

C282Y data

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Applications for HRM

Bio-Rad HRM Workflow

Experiment Considerations

SNP Genotyping

SsoFast EvaGreen & SNP Genotyping

Methylation Studies – CGU (Taipei)

Slide Number 57

Slide Number 58

病原菌检测程序

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PCR 扩增

结果分析

结果分析-阴阳性对照

结果分析-待测样本

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实时荧光定量实时荧光定量实验结果 PCRPCR实验结果分析分析 Hao Angela Field Application Specialist Gene Expression Division North China Bio-Rad Laboratories

定量分析 •绝对定量 •相对定量定量定量PCRPCR应用应用定性分析 •SNP分析，基因扫描 •阴阳性判定 •熔解曲线分析

应用实例--基因表达分析基因表达分析应用实例利用利用TaqMan ERBB2 在乳腺肿瘤在乳腺肿瘤 TaqMan技术研究技术研究ERBB2 组织标本中的表达差异组织标本中的表达差异

实验设计流程实验设计流程 RNA提取 RNA定量反转录(RT) 设计qPCR实验方法 RT-qPCR实验结果分析 Aurum Total RNA kit iScript cDNA Synthesis Kit

材料和方法材料和方法已知在50%的乳腺肿瘤样本中，ERBB2表达异常，因此可以作为一个检测标准选用GAPDH作为内标基因－FAM标记的ERBB2探针－VIC标记的GAPDH探针标准品（质粒）构造标准曲线多重PCR反应－无逆转录酶对照（监控基因组污染）阴性对照－无RNA对照（空白） • • • • •

RNARNA定性及定量分析定性及定量分析正常乳腺组织 RNA 5 hr. at 90°C Intact 乳癌组织 RNA Intact 7 hr. at 90°C Intact Intact 5 hr. degradation GAPDH gene degradati 7 hr. on Experion™ RNA HighSens Chip 0.1-5 ng/μl 100-6,000 nt Experion™ RNA StdSens Chip 5-500 ng/μl 100-6,000 nt

一步法＆两步法一步法＆两步法 iScript cDNA Synthesis Kit 1. 25°C 5 min 2. 42°C 30 min 3. 85°C 5 min 4. 冷却至4°C 在不同的反应管中运行RT & PCR 1. 反转录反应加热灭活反转酶 1.反转录反应 2. PCR 反应 2. PCR 反应

设计设计qPCRqPCR实验方法实验方法 Fam标记目标基因探针 VIC标记看家基因探针 1. 定性条件摸索 2. 荧光化学物质 • SYBR GREEN染料 • Taqman探针 3. 定量PCR条件优化 4. 单双通道相互验证

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